اختراع \\\\\\\\\\\\\\" توليد آنتي ژن نوتركيب HA1 ويروس آنفلوانزاي H5N1 در گياه كاهو (Lactuca sativa) به منظور توليد واكسن بيماري\\\\\\\\\\\\\\" در زمينه فني: بخش الف: نياز هاي انساني، زير بخش: سلامتي و بهداشت توليد واكسن هاي نوتركيب زمينه اي نسبتاً نوظهور و البته اميدواركننده در حوزه بيوتكنولوژي به حساب مي آيد. از ميان سيستم هاي مختلف بياني كه تاكنون براي توليد واكسن نوتركيب مورد استفاده قرار گرفته اند، سيستم هاي گياهي به دلايلي مانند ماهيت يوكاريوتي، هزينه نسبتاً پايين توليد و عدم آلودگي به پاتوژن هاي انساني و دامي مورد توجه بسياري از محققان قرار گرفته اند. آنفلوانزاي پرندگان يكي از بيماري هاي ويروسي مهم است كه اهميت جهاني داشته و موجب خسارت اقتصادي بالايي در صنايع ماكيان مي شود. اين ويروس پتانسيل ايجاد بيماريزايي شديد در ماكيان، پستانداران و همچنين انسان را دارد. هزينه بالاي توليد و خطر فعال شدن ويروس هاي ضعيف شده در واكسن هاي سنتي باعث شده است كه توليد واكسن نوتركيب اين بيماري مورد توجه قرار گيرد. هم اكنون واكسن‌هاي تجاري بسياري با چرخه توليد طولاني و عدم پاسخ گويي مناسب در مقابل پاندمي ها براي مقابله با اين بيماري استفاده مي‌شوند اما واكسن نوتركيب HA1 توليدي در گياه با قابليت توليد حجم بالاي پروتئين در مدت زمان اندك و بصورت مقرون به صرفه قادر است در زمان مواجهه با خطر پاندمي H5N1، تا زمان ساخته شدن واكسن اختصاصي سويه به منظور كاهش عوارض باليني مورد استفاده قرار گيرد. عمده واكسن هاي مورد استفاده چه واكسن هاي نوتركيب و چه واكسن هاي مرسوم تجاري داراي بخش هاي آنتي ژني غيرضروري هستند كه موجب افزايش زمان ايمني زايي و هزينه هاي توليد مي شوند اما واكسن نوتركيب HA1 كه زيرواحد اصلي گليكوپروتئين غشاء ويروس يعني هماگلوتنين است بدليل وزن ملكولي پائين و توان آنتي ژنيسيتي بالا، قادر به جايگزيني پروتئين كامل بوده و كانديد جذابي است كه توليد آنتي بادي هاي خنثي كننده ويروس آنفلوانزا را القا كند. اين آنتي ژن با داشتن ويژگي ايميونوژنيسيتي بالا، باعث القاي پاسخ ايمني در بدن ميزبان مي شود و از ورود ويروس بدرون سلول ميزبان و تكثير آن ممانعت بعمل مي آورد و با بيان اين آنتي ژن در گياه كاهو، مي‌توان پروتئين نوتركيبي كه باعث افزايش سيستم ايمني حيوان و انسان مي‌شود، توليد نمود. بنابراين كانديد مناسبي براي توليد واكسن نوتركيب محسوب مي شود. در اين اختراع، آنتي ژن HA1 به عنوان زيرواحد بزرگ پروتئين هماگلوتنين ويروس آنفلوانزاي H5N1 بطور پايدار از طريق سيستم تراريختگي مبتني بر اگروباكتريوم در گياه كاهو بيان شد. به منظور بررسي امكان بيان پروتئين HA1 در سيستم گياهي، توالي كدكننده آنتي ژن HA1 بهينه سازي شده، سنتز و با افزودن توالي كوزاك، تگ هيستيدين و پپتيدهاي راهنماي KDEL و ZERA مورد تغيير قرار گرفت (شكل شماره 1). در اختراع حاضر، ارزيابي پايداري و وراثت پذيري آنتي ژن HA1 در لاين هاي تراريخته كاهو بر اساس آزمون مقاومت به كانامايسين و PCR در نسل هاي اول، دوم و سوم انجام شده و بيان ترانسژن در آن ها در سطح رونويسي و ترجمه مورد بررسي قرار گرفت. بعلاوه اثر دو پپتيد راهنماي KDEL و ZERA در تجمع پروتئين به ترتيب در شبكه آندوپلاسمي و اجسام پروتئيني مورد بررسي قرار گرفت. لاين هاي هموزيگوت بدست آمده در نسل سوم بيان قابل توجه و پايداري از آنتي ژن را در آزمون هاي Real Time PCR و الايزا نشان دادند. بيان پروتئين نوتركيب HA1 در لاين هاي هموزيگوت كاهو با استفاده از آنتي بادي تگ هيستيدين و آنتي بادي اختصاصي HA1 در آزمون هاي اليزا و وسترن بلات، مورد بررسي قرار گرفت. قابليت ايمني زايي HA1 در تحريك توليد آنتي بادي اختصاصي نيز بصورت تزريقي و خوراكي در حيوانات مدل مورد آناليز قرار گرفت. نتايج اليزا نشان داد كه واكسن نوتركيب توليدي مي تواند سيستم ايمني ميزبان را تحريك كند كه اين با مشاهده حضور آنتي بادي هاي اختصاصي در سرم بدست آمده از حيوانات تيمار شده به اثبات رسيد. علاوه بر اين، از آن جا كه يكي از اهداف مهم پژوهش حاضر افزايش سطح بيان ترانسژن در لاين هاي تراريخته از طريق اعمال راهكارهاي مختلف بود، ميزان بيان آنتي ژن در لاين هاي نسل سوم كاهو به شكل كمي اندازه گيري شد. نتايج نشان داد كه سطح بيان ترانسژن در لاين هاي هموزيگوتLLK211 و LLZ121 به ترتيب 344/3 (86/59 ميكروگرم بر گرم وزن تربرگ) و 371/4 (90 ميكروگرم بر گرم وزن تربرگ) درصد كل پروتئين هاي محلول گياه بود. لاين هاي هموزيگوت پايدار نسل سوم كه پروتئين HA1 را در سطح بالايي بيان نمودند اميدبخش توليد اين آنتي ژن ايمني زا در كاهو مي باشند و بذور تراريخته ذخيره شده اين لاين ها را مي توان در آينده در مقياس بالا كشت نمود و گياهان تراريخته حاصل را در جهت توليد آنتي ژن ايمني زا در مواقع ضروري تخليص و استفاده نمود. بنابراين نتايج اين اختراع نشان داد كه با به كارگيري راهكارهاي مناسب مي توان به يك واكسن نوتركيب موثر عليه آنفلوانزاي پرندگان دست يافت. هدف از ارايه اختراع مورد ادعا اين است كه آنتي‌ژن‌هاي مشتق شده از برگ گياه كاهوي ترانس ژنيك، جايگزين مناسبي براي ساير آنتي ژن‌هاي مرسوم است. علاوه بر اين با توليد اين پروتئين نوتركيب به عنوان واكسني با هزينه بسيار كم و بدون هيچ‌گونه عارضه خاص مي‌توان در جهت تقويت و بهبود سيستم ايمني بدن به منظور ايمني درماني فرد بيمار گام مؤثري برداشت.

خلاصه فني اختراع خلاصه فني اختراع عبارت است از سه عدد سنسور حساس به شعله و دود قابل نصب بر قسمت جلويي وداخلي خودرو و قسمت باك خودرو و شيلنگ هاي نسوز و مقاوم در برابر حرارت و ناشي از سوختگي سوزنهاي پخش كننده پودر دي اكسيد كربن نصب شده بر سر شيلنگها و كپسول اتش نشاني برد الكتريكي براي نصب سنسورها منبع تغذيه براي فعال ساختن سنسورها

اين كارت هوشمند كارتي است كه از يك ريزپردازنده و چيپ حافظه و يا فقط چيپ حافظه بدون منطق برنامه پذير تشكيل شده است. كارت داراي ريزپردازنده مي تواند اطلاعات روي كارت را اضافه تغيير حذف و مديريت نمايد در حاليكه كارت فقط داراي حافظه مانند كارت هاي اعتباري تلفن مي تواند فقط يك عمليات از پيش تعريف شده را قبول كند. اين كارت هوشمند بر خلاف كارت هاي نوار مغناطيسي مي تواند كليه توابع عملياتي و اطلاعات مربوطه را در خود داشته باشد بنابراين در زمان انجام تراكنش نياز به ارتباط با بانك اطلاعاتي نخواهد داشت. اين كارت ريزپردازنده حافظه ذخيره سازي و امنيت بيشتري را نسبت به كارت هاي نوار مغناطيسي فعلي ارائه مي كند. اين كارت هوشمند محلي امن براي نگهداري اطلاعات حساس و مهم ازقبيل شناسايي اطلاعات مالي و اعتباري ميباشد و وقتي شناسايي لازم است بررسي PKI يا زير ساخت كليد عمومي و كارت هاي هوشمند بسيار مهم است.

نانو پودرهاي اكسيد فلزات در صنايع مختلفي نظير صنايع الكتريكي، هوافضا، اپتيك، الكترونيك و غيره كاربرد فراواني پيدا كرده اند. براي سافت اين نانو پودرها از روش هاي مختلفي نظير روش هاي احتراقي، سل ژل، اسيدي و هيلروترمال استفاده مي شود ‏اين در حالي است كه با توسعه ي روش هاي ساخت اين مواد محقق ها به دنبال دستيابي به خواص مطلوب تري از جهات گوناگون نظير اندازه ريزتر و توزيع يكنواخت ذرات و همچنين سنتز تركيبات جديد مي باشند ‏اكسيد فلزات با استفاده از روش هيدرو ترمال نيز قابل توليد است. روش كلي شامل گرم كردن مخلوطي از نمك فلز، آب مقطر و مواد اصلاح كننده سطح تا دماي بالاي حالت فوق بحراني آب و سرد كردن مي باشد. در اين روش ابتدا شرايط جوانه زني ايجاد مي شود و با كنترل دما، از رشد ذرا ت جلوگيري مي گردد ‏براي رسيدن به اين هدف راكتوري به گنجايش مورد نياز طراحي و از جنس مناسب (به منظور تحمل دما و فشار بسيار بالاو مقاوم به شوك حرارتي و خوردگي) ساخته مي شود ‏براي گرم كردن محفظه از كوره و با كمك حمام نمك (بدليل انتقال حرارت بالاتر و همگن بودن دماي مذاب نمك) و براي سرد كردن از آب (و يا مخلوط آب و يخ و الكل) استفاده مي گردد. از مواد اصلاح كننده سطح براي كنترل شكل و صافي سطح ذرات استفاده مي گردد ‏بدين ترتيب با بهينه سازي شرايط دمايي و زماني مورد نظر و با استفاده از افزودني ها و فعال كننده هاي مناسب سعي بر آن است تا ذراتي با اندازه و شكل كنترل شده توليد گردد ‏به منظور گرم كردن محلول آبي به شرايط دمايي و فشار مناسب راكتوري با قابليت تحمل شرايط ويژه اي ‏ لازم است ‏ابتدا طراحي‏ مورد نياز با ظرفيت mm3 ٠ 5 ‏به كمك نرم افزار Catia ‏انجام گرفت ‏و سپس تحليل تنش توسط نرم زار Ansys ‏انجام شد. در برنامه انسيس از المان 42 Quade nod ‏استفاده شد كه براي اشكال سيلندري شكل داراي ضخامت مناسب مي باشد ‏براي طراحي Safety Factor ‏, ‏در نظر گرفته شد.طراحي راكتور طوري صورت پذيرفت كه آب بندي به خوبي انجام گير( و در عين حال نكات ايمني رعايت شود ‏دماي كاري اين راكتور تا . . ٤ ‏درجه سانتيگراد و فثسار داخلي آن Barll ٠ ٣٠ ‏پيش بيني شده است در نهايت از فولاد٣ ‏براي طراحي استفاده شد ‏راكتور داراي سه قسمت اصلي مي باشد ١ ‏- بدنه راكتور: بزرگترين قسمت راكتور مي باشد و محلول مورد نظر در بدنه ريخته مي شود، اين قسمت مستقيما با حمام نمك در تماس قرار مي گيرد و انبساط و انقباض زيادي را متحمل مي شود ‏جداوه داخلي بدنه نيز فشار زيادي را متحمل مي شود بنابراين در طراحي جد اره قست از داشتن هرگونه سطوح تيزي پرهيز شد ٢ ‏- كنيك (مسدود كننده‏): اين بخش مانع از فروج سيال از آن مي شود. كنيك پس از بسته شدن درب محفظه بايد فشار زيادي را به دهانه راكتور وارد كند بنابراين صافي سطح اين قست تلورانس ابعادي در حد ‏مورد نظر است ٣ ‏- درب راكتور: نگهداشتن كنيك روي بدنه راكتور در شرايط دمايي و فشاري كنترل شده وظيفه اين بخش راكتور مي باشد و براي كمك به اين منظور رزوه هاي عميق در نظر گرفته شد ‏جك بولت ‏به منظور افزايش قدرت آببندي راكتور زاويه كنيك ٦ ‏درجه انتخاب شد، زاويه كوچكتر فشار بيشتري را بهينه وارد كرده باعث تقويت آببندي مي شود. اما وجود زاويه كوچك بين كنيك و بدنه، صافي سطوح و فشار وارده بالا به كنيك حين انجام تست سبب گير كردن كنيك درون بدنه پس از انجام هر تست مي شود كه براي رفع اين مشكل در طراحي بر روي كنيك جك بولت تعبيه شد ‏به منظور تست اين راكتور، براي آغاز نانو پودر آلومينا توليد گرديد به اين ترتيب كه ابتدا 25cc ‏محلول 2 ‏مولار تمك آلومينيوم نيترات در راكتور ريخته شد،كنيك روي بدنه داشته شدو و بعددرب به منظور آب بندي ثانويه و فشر وارد كردن به كنيك روي آن قرار گرفت. محفظه در حمام نمك در سه دماي ٠ ‏-,_ ٠ ٤٠ ‏، ٠ ٠ ‏..,- ٣٥٠ ‏و ٤٥٠ ‏- ٠ ٤٠ ‏درجه سانتي گراد به مدت ٥ دقيقه قرار گرفت وآب سريعا سرد شد ‏پودر بدست آمده با استفاده از الكل و آب مقطر ثستشو داده شد و سپس توسط سانتريفيوژ نانو پودر ها جدا گشت

روش ساخت فوم آلومينيومي با استفاده از ماده حذف شونده پلي استايرن داراي مزيت كنترل بسيار عالي بر روي پراكندگي و اندازه تخلخل مي باشد. فوم بدست آمده داراي وزن بسيار سبكي مي باشد. كاربرد اين فوم در وسايل نقليه زميني و هوايي مي باشد همچنين به علت وزن پايين در سازه هاي سبك مورد استفاده قرار مي گيرد همين طور اين ساختار قابليت جذب صدا و انرژي بالايي دارد. فوم آلومينيومي با درصد گسترده اي از تخلخل از اين روش قابل دستيابي است.